东北师范大学20xx年基因工程试卷b卷内容摘要：
体载体的基因间隔区插入 的一段调节基因及 lac Z的 N端 146 个氨基酸残基编码基因，其编码产物为β — 半乳糖苷酶的α片段。 突变型 可表达该 酶的 W 片段（酶的 C 端）。 单独存在的α及 W 片段均无β半乳糖苷酶活性，只有宿主细胞与克隆载体同时共表达两片段时，宿主细胞内才有β半乳糖苷酶活性，使特异性作用物变为蓝色化合物，这就是所谓的α 互补。 （其中的一例，另外表达意思相同也行） 简答题 4 题 1. 引物设计原则 1） 引物的长度一般为 1530 bp，常用的是 1827 bp，但不应大于 38 bp。 2）引物 3′端决定引物的特异性， 3′端与模板 DNA 一定要配对。 设计引物时应当避免在引物的 3′端使用碱基 A，引物 3′端也不要是编码密码子的第三个碱基，以免因为密码子第 3 位简并性而影响扩增特异性。 3） G+C 含量一般为 40%~60%。 按公式 Tm=4（ G+C） +2（ A+T）估计引物的 Tm 值，有效引物的Tm 值为 55~80℃ ，以接近 72℃为最好。 4)引物与非特异扩增序列的同源性不要超过 70%或有连续 8 个互补碱基同源。 5)引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤（ A、 G)或聚嘧啶 (T、 C)的存在。 尤其 3′端不应超过 3 个连续的 G 或 C，因这样会使引物在 G+C富集序列区错误引发。 6)两引物之间不应有互补性，尤 应避免 3′端的互补重叠以防引物二聚体的形成。 一对引物间不应多于 4 个。阅读剩余 0%
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