3130简明使用手册

3130简明使用手册内容摘要：

一个纯荧光除在它自己光谱的中心波长处能采 集到信号 N1外，在其他荧光信号光谱的中心波长处亦能检测到信号而产生信 号重叠。 为了校准信号重叠，需知道一种荧光信号在其他荧光信号处产生的重叠系数。 所以，我们用四（或五）条不同长度的ＤＮＡ片断分别标记上不同的荧光素来计算这些系数。 最后得到一个４ｘ４（或５ｘ５）的数据矩阵。 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 13 页 共 32 页 何时作光谱校正。  使用新的荧光染料  激光或 CCD被调节或更换后  不同颜色的荧光间出现干扰（有拔起或下压峰）  参数的改变（荧光类型，毛细管类型和毛细管长度） 如何作光谱校正。 两种类型的校正标准样品 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 14 页 共 32 页 样品准备  按 照试剂盒说明书用HiDi甲酰 胺 混合校正标准样品  震荡离心  95度变性 5分钟后 立即冰浴 2分钟  震荡离心  在 样品 板中加入样品（ 96孔板加 10ul， 384孔板加 5ul）  用橡胶垫装配样品板，装配后橡胶垫必须平整，样品板上的孔与橡胶垫上的孔要对齐，如图 橡胶垫未对齐样品孔 橡胶垫未对齐样品孔 橡胶垫未对齐样品孔 橡胶垫对齐了样品孔  短甩离心， 1500g X 5s  确认所有孔的样品都在底部 ,如右图  按下图组装样品板 样品在底部 样品板固定器 橡胶垫 样品板 样品板基座 组装好的样品板 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 15 页 共 32 页 注意。 固 定器与橡胶垫的孔一定要对齐， 否则会损毁毛细管。 固定器与橡胶垫的孔 没有对齐 创建光谱校正用的 protocol  选择 GA Instruments ga3130 Protocol Manager.  在 Instruments Protocols界面中点击 New按钮  在 Name中为 Protocol命名  在 Type下拉菜单中选择Spectral  依次选择正确的 DyeSet、Polymer、 Array Length、 Chemistry和 Run Module，点击 OK。 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 16 页 共 32 页 创建光谱校正板  选择 GA Instruments ga3130 instrument name Plate Manager.  点击 New按钮，在弹出窗口中分别输入以下信息 样品板名字 可选项：样品板的相关描述 选择 Spectral Calibration 选择 96well 输入所有者的名字 输入操作者的名字 点击 OK按钮  在 Spectral Calibration Plate Editor dialog界面中，输入以下信息 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 17 页 共 32 页 样品名 相关信息 前面创建的 Protocol  点击 OK按钮，则一个样品板记录创建完成 运行光谱校正板 ：  选择 GA Instruments ga3130 instrument name Run Scheduler.  将样品板放到自动进样器上，注意板的方向，此时 RunScheduler界面中板的指示块由灰色变为黄色 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 18 页 共 32 页  点击 FindAll按钮，找到光谱校正的样品板的文件名  点击该文件名后，再点击黄色的板的指示块， 此时，指示块将右黄色变为绿色  在 DC软件的工具栏中，点击 ，在随后的对话框 中点击 OK来开始运行 确认光谱校正成功 /失败状态  选择 GA Instruments ga3130 instrument name Instrument Status Event Log.  查看各道毛细管的状态 ,如下图  相关标准 毛细管位置 是否成功 Q值 Condition number 查看光谱校正结果  选择 GA Instruments ga3130 instrument name Spectral Viewer.  在 Dye Set下拉菜单中，选择相应的荧光染料  在样品板图上选择某个孔来查看其光谱校正结果 Dye Set Z AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 19 页 共 32 页 Dye Set E DS33(G5) 故障排除 AppliedBiosystems 3130简明使用手册 第 20 页 共 32 页 症状 可能原因 解决方法 无信号 样品预处理 问题 更换样品，使用新的 HIDI甲酰氨 样品板中有 气泡 离心 光谱校正失败或显示“ No candidate spectral files found” 毛细管阻塞 手工命令灌胶，观察毛细管在阴极的喷胶情况来判断其是。