生物技术制药复习重点

生物技术制药复习重点内容摘要：

养细胞的种类：原代细胞培养和传代细胞培养。 ②根据培养基的不同：液体培养和固体培 养。 ）。 答：优点：适用的细胞较广；容易更换培养液； 容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度。 缺点：操作比较麻烦； 培养条件不易均一；传质、传氧较差；不能有效监测细胞的生长；需要合适的贴附材料和足够的面积； 扩大培养比较困难，投资大。 答：优点：操作简单，培养的体积大、成本低；培养条件比较均一； 传质、传氧较好；传代时无需消化分散；容易扩大培养规模。 缺点：由于细胞体积较小，难采用灌流培养，细胞密度较低。 答： （ 1）、 包埋在在体内的细胞可以获得保护，避免了剪切力的损害。 （ 2） 、可以获得较高的细胞密度，一般都在 10^7~10^8 个 /ml以上。 （ 3） 、可以使产品浓缩在微囊内，利于下游产物的纯化。 （ 4） 、可以采用多种生物反应器进行大规模培养。 、类型及应满足哪些条件。 答：应满足的条件：材质无毒；结构的传质、传热和混合性能；密封性好；参数能自动检测和调控；长期连续运转；内面光滑、无死角；拆装、清洁、维修和消毒；设备成本。 动物生物反应器的作用： 是给动物细胞的生长代谢提供一个最优化的环境，从而使其在生长代谢过 程中产生出最大量、最优质的所需产物。 反应器类型：搅拌罐式反应器、气升式生物反应器、中空纤维式生物反应器、透析袋或膜式生物反应器和固定床或流化床式生物反应器。 第四章。 从哪些方面可以对单克隆抗体进行改造。 答：阻碍： A．单克隆抗体的均是鼠源性抗体，应用于人体可内可产生人鼠源抗体，加速了排斥反应，在人体内的半衰期只有 56h，难以维持有效药物的作用靶组织时间。 B．完整的抗体份子 Ig分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度。 改造： A．降低单克 隆抗体的免疫原性。 B．降低单克隆抗体的相对分子质量 （ 1）人 鼠嵌合抗体：由人抗体的恒定区与鼠源单抗的可变区融合得到。 （ 2） .改型抗体：把鼠抗体的 CDR序列移植到人抗体的可变区内，所得到的抗体 （ 3）小分子抗体小分子抗体包括： Fab、 Fv或 ScFv、 单域抗体、 最小识别单位。 这些部位都可以改造。 流程：将有用抗原免疫过的淋巴细胞与骨髓瘤用 PEG进行杂交融合。 ① 把融合的细胞在 HAT培养基上选择出来。 ② 将选择后的整合细胞分散，培养成杂交瘤细胞。 ③ 使能产生单 克隆抗体的杂交瘤细胞克隆化。 ④ 杂交瘤细胞抗体的性状的鉴定。 ⑤ 单克隆抗体的大量制备，一是在培养液中大更是繁殖，二是注入纯系小鼠腹腔中大量繁殖。 ⑥ 单克隆抗体的纯化。 制备方法： 体内诱生法和体外法。 答：优点：简单，比较经济，所得单克隆抗体量较多且效价较高，可有效地保存杂交瘤细胞株和分分离已污染的杂菌的杂交瘤细胞株。 缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多种杂蛋白，给纯化带来难度。 答：①人 鼠嵌合抗体：保持鼠源性单克隆抗体 的抗原结合特异性，但对人免疫原性大幅下降了。 ②改型抗体：鼠源性单克隆抗体的互补决定区（ CDR区）序列替换人的 Ig分子中的 CDR序列。 基本消除免疫原性。 ③小分子抗体： 7 a) Fab 将 Iｇ的重链在铰链区的 C端裂解，获得两个完全相同的抗原结合片段。 才铰链区和二硫键相连。 有完整的生双价抗体活性，相对分子质量减少为三分之一，排斥反应也降低，人体内很稳定。 b) Fv 含有 L链和 Fd链一半的 N端可变区。 有完整的抗体相似的结能力，相对分子质量减少为六分之一。 ④单链抗体 scFv：单链易改造；体内半衰期短，免疫原性低；稳定性 低，重轻链之间的分子间作用力弱；功能单一，只能与一种抗原特异性结合；亲和力低，稳定性差，体内清除过快。 ⑤ 单域抗体：只由一个 CDR构成。 5．多功能抗体的优点。 答：具有高亲和力性能，由于具有多个结合价，可同时与细胞膜上相邻的两个或多个靶抗原结合，与肿瘤细胞表面抗原的多价结合有利于肿瘤的影像分析及治疗。 6． 有应用价值的多功能抗体应具备有哪些特征。 a) 能高选择性，高亲和性地同靶抗原或肿瘤相关抗原结合。 b) 在血循环中，与效应细胞或细胞毒触发分子有较低亲和力。 c) 应为人源化抗体，最大限度地减少人抗鼠蛋白的排斥反应，使得 复给药不受限制。 d) 分子应大小适中，既能渗透到肿瘤组织内部，又能保证适当的滞留时间。 7． 抗体导向酶 前药疗法中酶和前药有哪些要求。 答： （ 1）、对酶的要求：活化酶最好来自非哺乳动物，而人体内不存在相应的类似物，以保证高度的特异性。 酶还能通过化学交联与单抗结合，在较长的一段时间内保持稳定性和活性。 对前药的要求：前药本身应无活性或活性很低，只能被相应的酶活化为高度扩散性的小分子，以实现在肿瘤组织内的广泛分布和杀伤肿瘤细胞。 而且前药还 应具有极短的生物半衰期，避免重新进入循环产生非特异性毒性。 第五章 次级代 谢作用的定义及产物的特征。 答：（ 1）定义：是由特异蛋白质调控产生的内源化合物的合成、代谢及分解作用的综合体现。 2）产物特征： a：有明显的分类学区域界限。 b：其生物合成需在一定的条件下才能发生。 c：缺乏明确的生理功能。 d：是生物活动的多余成分。 植物细胞培养中细胞团产生的原因。 答： 1）、细胞分裂之后没有进行细胞分离。 2）、在间歇培养过程中细胞处于对数生长后期是，开始分泌黏多糖和蛋白质，或者以其他方式形成粘性表面，从而形成细胞团。 植物细胞培养中常用的灭菌剂有哪些。 答：次氯酸钙、次氯酸钠、氯化 汞。 还有（过氧化氢、溴水、硝酸银、抗生素） 细胞的两步培养法各有什么目的。 答：第一步采用适合细胞生长的培养基 —— 生长培养基 第二步采用适合次级代谢产物合成的培养基 —— 生产培养基 前者是为了实现细胞的高生产率，后者获得一定含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或较少的碳源，得到最佳生长。 影响植物次级代谢产物产生和累积的因素。 答： 生物条件：外植体 季节 休眠等。 2 、物理条件：温度 光 通气 渗透压。 化学因素：无机盐 、碳源 、植物生长剂 、维生素、 氨基酸 、前体。 工业培养条件：培养灌类型 、 通气、培养方法等。 植物细胞和微生物相比具有什么的差异。 答：（一）、结构组成： 细胞壁的组成不同：植物细胞的成分主要是纤维素，微生物的细胞壁主要是由肽聚糖组成。 植物细胞拥有大的液泡和质体（如叶绿体）。 （二）、 用于培养时： 植物细胞对营养的要求较复杂，而微生物要求较简单。 植物细胞会有有限的分化，而微生物不会。 由于细胞壁的组成不同，植物细胞在培养时不能搅拌，而微生物可以。 7．植物细胞培养的生物反应器类型。 答： 1）、机械搅拌生物反应器 2）、鼓泡塔生物反 应器 3）、气升式生物反应器 4)、转鼓式生物反应器 5)、 固定化生物反应器 在植物细胞大规模培养中应综合考虑哪些因素。 8 1）、供养能力的及气泡分散程度 2）、剪切力大小及对细胞的影响。 3）、高密度培养时培养液的混合程度。 4）、温度、 PH、级营养物浓度的控制能力。 5）细胞团大小的控制能力。 6）易于放大。 两相培养系统须满足什么条件。 答：添加相无毒，易吸附易溶解。 两相易分开，不吸附培养基 第六章 ： 答：（ 1）微生物种类多，品种齐全 （ 2）微生物 生长繁殖快，生长周期短，产量高 （ 3）培养方法简单，原料来源丰富，价格低廉，经济效益高，并可以通过控制培养条件来提高酶的产量 （ 4微生物具有较强的适应性和应变能力 ： 答： 1繁殖快，产酶量高，酶的性质应符合使用要求，最好是产生胞外酶的菌， 2不是致病菌，在系统发育上与病原体无关，也不产生有毒物质， 3产酶性能稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体， 4能利用廉价的原料，发酵周期短，易于培养 ： 答： 1可以较长时间内多次使用，酶的稳定性高。 2反应后，酶与底 物和产物易于分开，易于纯化，产品质量高。 3反应条件易于控制。 4酶的利用率高。 5比水溶性酶更适合于多酶反应。 ： 答：优点：操作简单，可选用不同电荷和不同形状的载体，固定化过程和纯化过程同时实现，酶失活后载体仍可以再生。 缺点：最适吸附酶量五规律可循，对不同的载体和不同酶的吸附条件不同，吸附量和酶活力不一定成平行关系，同时载体与载体之间结合力不强，酶易于脱落，导致酶活力下降并污染产物。 答：酶以共价键结合于载体上即将酶分 子上非活性部位功能团与载体表面反应基团进行共价结合的方法。 优点：酶与载体结合牢固，稳定性好， 缺点：条件苛刻，操作复杂，而且采用了比较强烈的反应条件，会引起酶蛋。