泌尿外科专业毕业论文未成熟树突状细胞诱导糖尿病小鼠异种胰岛细胞移植免疫耐受的研究

泌尿外科专业毕业论文未成熟树突状细胞诱导糖尿病小鼠异种胰岛细胞移植免疫耐受的研究内容摘要：

血糖、体重及皮毛等变化。 结果： 1．小鼠经腹腔注射不同剂量 (80mg/kg， 200mg/kg、 240mg/kg)STZ 诱导糖尿病 模型的成功率分别为：0％， ％和 ％； 200mg/kg 和 240mg/kg STZ 腹腔注射组诱导糖尿病模型小鼠实验观察期内的生存率分别为： ％和 40％。 2．小鼠骨髓来源细胞经低剂量 GMCSF 联合 IL4扩增出的细胞具有典型 DC 的形态特征，并且高度表达 imDC的表面分子，基本不表达成熟 DC 的表面分子。 3．每只 Wistar 大鼠胰腺可分离纯化出胰岛细胞约 个。 胰岛细胞的纯化达到 80％，存活率为 95％。 4． T1 组糖尿病小鼠的血糖浓度始终维持在糖尿病水平，体重随时间 延长而下降，且部分小鼠病程中出现皮毛污秽粘连、高渗性昏迷，感染等表现；T2组小鼠经肾被膜下异种胰岛细胞移植后血糖浓度很快恢复至正常水平，体重上升，但是术后 5 天血糖开始再次升高，体重随之下降，表明单纯胰岛细胞移植排斥反应强烈，胰岛细胞短期内失功； T3组和 T4组小鼠经外周静脉注射经供体抗原修饰的自身骨髓细胞培养分化的 imDC后行肾被膜下异种胰岛细胞移植，移植后小鼠血糖浓度在术后第 2天左右恢复正常，并且血糖浓度维持在正常水平的时间较 T2组明显延长，体重未见明显下降。 结论： 1．一次性腹腔注射STZ200mg/kg 诱导 BALB/c 小鼠的糖尿病模型成功率和生存率明显优于STZ80mg/kg 和 STZ240mg/kg 注射组。 2．小鼠骨髓细胞经体外低剂量细胞因子诱导，可扩增分化充足的 imDC。 3．异种胰岛细胞移植术前注射 imDC可明显延长糖尿病小鼠移植术后血糖浓度维持正常水平的时间，和单纯胰岛细胞移植组相比可明显减轻移植排斥反应，延长移植物存活时间。 糖尿病是严重威胁人类生命与健康的全球性多发病，胰岛素替代治疗不能阻止其并发症的出现，而 β 细胞替代治疗 (包括胰腺移植和胰岛细胞移植 )能达到生理性调控胰岛素分 泌的目的，并维持正常血糖。 但是移植物排斥反应始终影响移植效果，甚至导致移植胰岛失功。 树突状细胞 (dendritic cell， DC)的外周致耐受作用通常由未成熟树突状细胞 (immature dendritic cell， imDC)介导，由于 imDC不表达共刺激分子，当 imDC 携带自身抗原移行至外周淋巴组织后不能使 T细胞活化，从而诱导 T 细胞无能，导致自身耐受。 基于这一理论，建立小鼠糖尿病模型，经外周循环注射负载供体抗原的小鼠 imDC 诱导异种免疫耐受后，移植大鼠胰岛细胞，观察糖尿病小鼠移植物存活时间和移植物排斥 反应。 方法： 1．不同 STZ 剂量建立糖尿病动物模型：将 36只雄性， 6～ 8周 SPF级的 BALB/c 小鼠完全随机分为 G1(对照组 )、 G G3和 G4组，进行糖尿病小鼠建模试验，分别用柠檬酸 柠檬酸钠缓冲液和 80mg/kg、 200mg/kg、 240mg/kg 三种浓度的 STZ进行腹腔注射，监测小鼠血糖浓度，分析建模成功率和生存率，确定最佳建模剂量。 2． imDC 提取和培养：将 20只雄性， 6～ 8周 SPF级的 BALB/c 小鼠，取股骨、胫骨冲洗骨髓，冲洗液经淋巴细胞分离液离心，提取单核细胞。 单核细胞经洗涤后置入含 20％胎牛血清的 RPMI1640 培养基中，在 37℃ ， 5％ CO2条件下培养，第 5 天分别加入细胞因子 IL GMCSF。 第 7天收取贴壁细胞，标定单克隆抗体，经流式细胞仪鉴定细胞数量及 imDC 比例。 3．胰岛细胞提取和纯化移植：30只雌性， 8～ 10 周 SPF 级 Wistar 大鼠，无菌取胰腺并经胶原酶适度消化，消化液经密度梯度离心分离纯化出胰岛细胞。 用 DTZ和 AOPI 染色分别鉴定胰岛细胞的形态和存活率。 4． imDC 预处理和胰岛细胞移植：将 40 只 BALB/c 小鼠完全随机分为 T T T T4组，建立糖尿病模型。 其中 T1组为糖尿病对照组，肾被膜下注射等量 RPMI1640 液； T2组为单纯胰岛细胞移植组，肾被膜下移植异种胰岛细胞； T3组和 T4 组为经 imDC 预处理后异种胰岛细胞移植组，外周静脉注射供体骨髓细胞培养扩增的 imDC 后经肾被膜下胰岛细胞移植。 监测各组糖尿病小鼠实验干预后血糖、体重及皮毛等变化。 结果： 1．小鼠经腹腔注射不同剂量 (80mg/kg， 200mg/kg、 240mg/kg)STZ 诱导糖尿病模型的成功率分别为：0％， ％和 ％； 200mg/kg 和 240mg/kg STZ 腹腔注射组诱导糖尿病模型小鼠实验观察期内的生存率分别为： ％和 40％。 2．小鼠骨髓来源细胞经低剂量 GMCSF 联合 IL4扩增出的细胞具有典型 DC 的形态特征，并且高度表达 imDC的表面分子，基本不表达成熟 DC 的表面分子。 3．每只 Wistar 大鼠胰腺可分离纯化出胰岛细胞约 个。 胰岛细胞的纯化达到 80％，存活率为 95％。 4． T1 组糖尿病小鼠的血糖浓度始终维持在糖尿病水平，体重随时间延长而下降，且部分小鼠病程中出现皮毛污秽粘连、高渗性昏迷，感染等表现；T2组小鼠经肾 被膜下异种胰岛细胞移植后血糖浓度很快恢复至正常水平，体重上升，但是术后 5 天血糖开始再次升高，体重随之下降，表明单纯胰岛细胞移植排斥反应强烈，胰岛细胞短期内失功； T3组和 T4组小鼠经外周静脉注射经供体抗原修饰的自身骨髓细胞培养分化的 imDC后行肾被膜下异种胰岛细胞移植，移植后小鼠血糖浓度在术后第 2天左右恢复正常，并且血糖浓度维持在正常水平的时间较 T2组明显延长，体重未见明显下降。 结论： 1．一次性腹腔注射STZ200mg/kg 诱导 BALB/c 小鼠的糖尿病模型成功率和生存率明显优于STZ80mg/kg 和 STZ240mg/kg 注射组。 2．小鼠骨髓细胞经体外低剂量细胞因子诱导，可扩增分化充足的 imDC。 3．异种胰岛细胞移植术前注射 imDC可明显延长糖尿病小鼠移植术后血糖浓度维持正常水平的时间，和单纯胰岛细胞移植组相比可明显减轻移植排斥反应，延长移植物存活时间。 糖尿病是严重威胁人类生命与健康的全球性多发病，胰岛素替代治疗不能阻止其并发症的出现，而 β 细胞替代治疗 (包括胰腺移植和胰岛细胞移植 )能达到生理性调控胰岛素分泌的目的，并维持正常血糖。 但是移植物排斥反应始终影响移植效果，甚至导致移植胰岛失功。 树突状细胞 (dendritic cell， DC)的外周致耐受作用通常由未成熟树突状细胞 (immature dendritic cell， imDC)介导，由于 imDC不表达共刺激分子，当 imDC 携带自身抗原移行至外周淋巴组织后不能使 T细胞活化，从而诱导 T 细胞无能，导致自身耐受。 基于这一理论，建立小鼠糖尿病模型，经外周循环注射负载供体抗原的小鼠 imDC 诱导异种免疫耐受后，移植大鼠胰岛细胞，观察糖尿病小鼠移植物存活时间和移植物排斥反应。 方法： 1．不同 STZ 剂量建立糖尿病动物模型：将 36只雄性， 6～ 8周 SPF级的 BALB/c 小鼠完全随机分为 G1(对照组 )、 G G3和 G4组，进行糖尿病小鼠建模试验，分别用柠檬酸 柠檬酸钠缓冲液和 80mg/kg、 200mg/kg、 240mg/kg 三种浓度的 STZ进行腹腔注射，监测小鼠血糖浓度，分析建模成功率和生存率，确定最佳建模剂量。 2． imDC 提取和培养：将 20只雄性， 6～ 8周 SPF级的 BALB/c 小鼠，取股骨、胫骨冲洗骨髓，冲洗液经淋巴细胞分离液离心，提取单核细胞。 单核细胞经洗涤后置入含 20％胎牛血清的 RPMI1640 培养基中，在 37℃ ， 5％ CO2条件下培养，第 5 天分别加入细胞因子 IL GMCSF。 第 7天收取贴壁细胞，标定单克隆抗体，经流式细胞仪鉴定细胞数量及 imDC 比例。 3．胰岛细胞提取和纯化移植：30只雌性， 8～ 10 周 SPF 级 Wistar 大鼠，无菌取胰腺并经胶原酶适度消化，消化液经密度梯度离心分离纯化出胰岛细胞。 用 DTZ和 AOPI 染色分别鉴定胰岛细胞的形态和存活率。 4． imDC 预处理和胰岛细胞移植：将 40 只 BALB/c 小鼠完全随机分为 T T T T4组，建立糖尿病模型。 其中 T1组为糖尿病对照组，肾被膜下注射等量 RPMI1640 液 ； T2组为单纯胰岛细胞移植组，肾被膜下移植异种胰岛细胞； T3组和 T4 组为经 imDC 预处理后异种胰岛细胞移植组，外周静脉注射供体骨髓细胞培养扩增的 imDC 后经肾被膜下胰岛细胞移植。 监测各组糖尿病小鼠实验干预后血糖、体重及皮毛等变化。 结果： 1．小鼠经腹腔注射不同剂量 (80mg/kg， 200mg/kg、 240mg/kg)STZ 诱导糖尿病模型的成功率分别为：0％， ％和 ％； 200mg/kg 和 240mg/kg STZ 腹腔注射组诱导糖尿病模型小鼠实验观察期内的生存率分别为： ％和 40％。 2．小鼠骨髓来源细胞经低剂量 GMCSF 联合 IL4扩增出的细胞具有典型 DC 的形态特征，并且高度表达 imDC的表面分子，基本不表达成熟 DC 的表面分子。 3．每只 Wistar 大鼠胰腺可分离纯化出胰岛细胞约 个。 胰岛细胞的纯化达到 80％，存活率为 95％。 4． T1 组糖尿病小鼠的血糖浓度始终维持在糖尿病水平，体重随时间延长而下降，且部分小鼠病程中出现皮毛污秽粘连、高渗性昏迷，感染等表现；T2组小鼠经肾被膜下异种胰岛细胞移植后血糖浓度很快恢复至正常水平，体重上升，但是术后 5 天血糖开始再 次升高，体重随之下降，表明单纯胰岛细胞移植排斥反应强烈，胰岛细胞短期内失功； T3组和 T4组小鼠经外周静脉注射经供体抗原修饰的自身骨髓细胞培养分化的 imDC后行肾被膜下异种胰岛细胞移植，移植后小鼠血糖浓度在术后第 2天左右恢复正常，并且血糖浓度维持在正常水平的时间较 T2组明显延长，体重未见明显下降。 结论： 1．一次性腹腔注射STZ200mg/k。