工业微生物菌种保藏技术(ppt52)-工艺技术(编辑修改稿)

工业微生物菌种保藏技术(ppt52)-工艺技术(编辑修改稿)内容摘要：

致冷速度降温 ， 直到温度达到相对温度之上几度的细胞冻结点 (通常为 30℃ )； (4)补加一定量的液氮至系统中 ， 使细胞在冻结点时尽可能快地发生相变； (5)细胞冻结后 ， 将致冷速度降为 1℃ /min， 直到温度达 50℃ ； (6)将安瓿迅速移入液氮罐中于液相 (196℃ )或 气相 (156℃ )中保存。 如果无控速冷冻机 ， 则一般可将安瓿或液氮瓶置于一 70℃ 冰箱中冷冻 4h， 然后迅速移入液氮罐中保存。 (三 )复苏 1． 从液氮罐中取出所需的安瓿 ， 立即置于冰浴中； 2． 迅速将安瓿置于 3740℃ 水浴中 ， 并轻轻摇动以加速解； 3．用巴氏吸管将安瓿中贮存培养物移接入含有2m1无菌液体培养基的试管中，用同一支吸管反复抽吸数次，然后取 (约 8滴 )转接入琼脂斜面上。 冻干保藏 冷冻干燥的基本方法：是通过在减压条件下使冻结的细胞悬液中的水分升华 ， 使培养物干燥。 此法是微生物菌种长期保藏的最为有效的方法之一。 冷冻干燥过程中必须使用冷冻保护剂 ， 目前国内常用脱脂乳和蔗糖 ， 国外尚有运用动物血清等的。 大部分微生物菌种可以在冻干状态下保藏 10年之久而不丧失活力。 而且经冻干后的菌株无需进行冷冻保藏 ， 便于运输。 培养物的冻干过程 冷冻真空干燥操作流程 安培瓶 配制保护剂 灭菌 菌种 培养 制备菌悬液 分装安培瓶 洗净烘干 装标签 加棉塞 预冻 真空干燥 测定水分 熔封管口 检查真空度 包藏 (三 )冻干菌种的保藏与再生 1． 保藏：冷冻干燥后的培养物在低于 5℃ 下保藏。 较低的保藏温度 (20～ 70℃ )对于培养物的长期稳定更好。 2． 复苏： (1)在超净工作台中用 70％ 酒精棉球擦洗安瓿 ， 然后用砂轮在安瓿中锉一道沟。 (2)用无菌纱布或无菌毛巾包好安瓿 ， 然后用手掰开安瓿。 (3)在安瓿中加入 ～ 1ml营养液体培养基 ， 慢慢旋转安瓿 ， 使冻干菌种复水。 然后将此转接到一含有再生培养基的无菌试管中 ， 或直接接种琼脂斜面或涂布平板。 (4)在指管中冻干的菌种通常为絮粉状 ， 可以将此直接振落入盛有 l～ 2ml液体培养基的试管中 ，轻轻振荡 5～ l0min， 然后用此悬液接种适宜的再生培养基。 将菌种定期在新鲜琼脂培养基上传代 ， 然后在一定的生长温度下生长和保存的传代保藏方法。 可用于实验室中若干菌种的保藏。 此法最为简单和经济 ， 且不要求任何特殊的设备。 但此方法易发生培养基干枯 、 菌体自溶 、 基因突变。 传代培养法 实验原理：保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于 厌氧细菌）培养好后，置 4C˚冰箱中存放，定期 进行传代培养、再存放。 可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体 石蜡来进一步延长保存期。 操作方法 斜面保藏法 将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置4C˚冰箱中包藏。 保藏时间依微生物的种类而定。 霉菌、放线菌及芽孢菌保存 2－ 4个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。 此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。 液体石蜡保藏法 将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端 1CM为准，使菌种与空气隔绝。 将试管直立，置低温或室温下保存。 此法实用且效果较好。 霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏 1－ 2年，普通细菌也可保藏 1年左右。 穿刺保藏法 按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4℃ 冰箱存放。