多种干货多糖含量测定及抗氧化性的研究毕业论文(编辑修改稿)

多种干货多糖含量测定及抗氧化性的研究毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

温烘干，用粉碎机粉碎，用40目筛筛取， 留着备用。 无水乙醇，邻苯三酚，双氧水，邻菲罗啉，磷酸盐 生理盐水缓冲溶液（用分析天平称 ， ， 酸氢二钾，溶于 800mL蒸馏水中，用盐酸调节溶液 pH为 ，然后加蒸馏水定容到 1L），硫酸亚铁，葡萄糖为国产分析纯，蒸馏水，维生素 C 溶液，蒽酮 硫酸溶液（称量 ，加入 100mL、质量分数 98%的浓硫酸溶液，摇匀，放在棕色试剂瓶中，低温保存），无水丙酮， TrisHCl（ pH=， ）缓冲溶液 （称取 25gTris试剂溶于蒸馏水中，加 8mL浓盐酸溶液，然后定容至 1L，高 压、 高 温 灭菌后室温下保存）。 实验器材 RE52AA 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）、 AL104电子分析天平 (瑞士梅特勒托利多仪器有限公司）、 UV1100紫外 可见分光光度计（上海美普达仪器有限公司）、离心机、 SHA水浴恒温振荡器（江苏省金坛市医疗器械有限公司）、 PHS3C型 pH计（上海天达仪器有限公司）、 真空抽滤机、 DF101干燥箱、锥形瓶、吸量管 (1mL、 2mL、 5mL）、洗耳球、比色管、容 量瓶。 实验方法 粗多糖提取的方法 多糖的提取一般有超微波辅助法、微波辅助法、酶法、热水浸提法。 本文所用的是热水浸提法。 它的原理是在热力作用下，细胞的质壁分离。 水溶剂渗入到细胞质、细胞壁中，溶解了液泡里的物质，并且通过细胞壁扩散到外部。 取一定量预处理过的样品，按 1:10的料液比加入 95%（ V/V）的乙醇，低温浸泡 12h。 过滤，滤渣按一定的料液比加入蒸馏水，热水浴中保温一定时间。 减压 抽滤得到滤液，滤渣二次浸提，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至原来体积的 1/4，加入 3倍于浓缩液的 95%（ V/V)乙醇， 3℃ 下放置过夜，密封 好 ，当有粒状沉淀和絮状胶状物产生后，用离心机以 30分钟、 3000r/min去上清液，沉淀复溶再离心、抽滤后，用无水丙酮、乙醇 多次 洗涤，干燥得到样品的粗多糖提取物，备用。 多糖提取率 =多糖质量 /样品质量 100% 标准曲线的绘制 [6] 先打开紫外分光光度计进行预热。 清洗七个比色管，干燥编号备用。 然后用分析天平称取 5 糖，蒸馏水溶解后，完全转移到 100mL容量瓶进行定容，得 糖标准溶液。 然后用 1mL的吸量管分别移取 、 、 、 、 、 的葡萄糖标准溶液于干燥的比色管中，再用 2mL的吸量管分别移取 、 、 、 、 ，补至。 将七个比色管放在冰水浴中，用 5mL的吸量管迅速移取 硫酸溶液分别加入比色管内，摇匀。 然后将 7个比色管放在沸水浴中加热 10分钟后，取出来，放在盛有自来水的大烧杯中冷却至室温。 用紫外分光光度计从低浓度到高浓度在 625nm波长下，分别测定它们的吸光度。 记下数据，以吸光度为纵坐标、葡萄糖浓度为横坐标，用 excel绘制葡萄糖溶液的标准曲线，得到相关系数和回归方程。 多糖含量 的 测定方法 用电子天平称取样品粗多糖提取物 ，三份，蒸馏水溶解后，完全转移到 100mL容量瓶中 并 且摇匀定容。 移取 25mL的比色管中，再移取 ,将比色管放入冰水浴中，迅速加 蒽酮 硫酸溶液，摇匀。 然后放在沸水浴中加热 10分钟，取出，放在乘有自来水的大烧杯中冷 却至室温。 以 蒸馏水 为参比，迅速用紫外分光光度计在 625nm的波长下，测得它的吸光度，然后代入回归方程求出多糖的浓度，并且算出多糖在样品粗提取物中的含量。 多糖对 羟基自由基 (OH）消除作用的测定方法 [7] 本文采用的是用 Fenton法反应形成羟基自由基的体系。 Fe2+ 与 H2O2 在Fenton反应中产生羟基自由基的方程式如下：  222 FeOH ===   3FeOHOH 向该反应体系中加入邻菲罗啉，由于羟基自由基活性很高 ， 能够很有效的被邻菲罗啉所结合，产生有色物质。 有色物质在 510nm处有最大吸收。 当加入多糖溶液后，多糖溶液就会与羟基自由基结合，减少了邻菲罗啉与羟基自由基结合而生成的有色物质，减弱了在 510nm处的吸光值。 通过测定添加了多糖溶液的体系的吸光度来判断它的消除能力。 方法如下： 首先用分析天平精确称量提取的样品粗多糖沉淀 ，用蒸馏水溶解后，在 100mL的容量瓶中定容，配成浓度为 ，取母液进行稀释 至浓度为 、 、 、 、。 配制维生素 C溶液用同样的方法。 取 6支干燥且干净的比色管，依次编号、分别向里面加入 溶液，磷酸盐 生理盐水（ pH=）缓冲溶液 ， 和 、 、 、 、 （注： 1号为空白对照，用蒸馏水代替多糖溶液）。 再加 ，迅速摇匀，再加 %的过氧化氢溶液 ， 将五支比色管放在 38℃ 的 热水浴中反应 1小时，然后迅速测定 6 各管在 510nm下的吸光度。 再将维生素 C药片研磨，称取，配制同浓度的维生素C溶液作对比。 清除率的计算： OH清除率 =(A0A样品 )/A0 100% 多糖对超氧自由基（ O 2）消除作用的测定方法 [8] 对超氧阴离子清除采用的是邻苯三酚自氧化法。 邻苯三酚可以在碱性条件下发生自身氧化生成超氧自由基（ O 2）、以及红色中间物质。 超氧自由基能够加速邻苯三酚的氧化速率，如果有清除剂的加入，会消除 O 2 ，减少了红色中间产物的积累，降低了在 310nm处的吸光度。 通过测定加入多糖溶液的体系的吸光度来判断它的消除能力。 方法如下： 取 6支干燥且干净的比色管，依次编号、分别向里面加入 、TrisHCl（ pH=， ）缓冲溶液 ， 放在 25℃ 的热水浴中 25分钟，然后向比色管中依次加入 、 、 、 、 、 （注： 1号管为空白对照，用蒸馏水代替多糖溶液）。 迅速加入在 25℃ 热水浴中预热 20分钟的邻苯三酚（ ） ，摇匀。 放置在 20℃ 水浴槽中反应 5分钟，最后加入 HCL（ 8mL/L）溶液结束反应。 将各管在 310nm处测定它的吸光度，再将维生素 C药片研磨，称取，配制同浓度的维生素 C溶液作对比。 清除率计算： O 2 清除率 =(A0A样品 )/A0 100% 2 结果与分析 干木耳粗多糖提取的条件优化及含量的测定 多糖在热水提取的过程中，有许多因素会影响多糖提取率。 本文针对浸提料液比、温度、时间这三个条件进行探究 [9]。 浸提时 间对多糖提取的影响 固定温度为 85℃ 、料液比 1:30不变。 时间为 、 、 、 ，根据 ，结果如下： 表 21 浸提时间对多糖提取率的影响 时间 /h 1 2 3 4 提取率 /% 由结果得出，随着时间的增 大 ，提取率先增 大 后减小。 当浸提时间为 ，提取率最大，继续增加时间，提取率开始下降。 浸提温度对多糖提取的影响 固定浸提时间为 ，料液比 1:30不变。 温度为 50、 60、 70、 7 80、 890、 95℃。 根据 ，结果如下： 7 表 22 浸提温度对多糖提取率的影响 温度 /℃ 50 60 70 75 80 85 90 95 提取率 /% 由上表中数据表明，随着温度的升高，多糖的提取率也会随之增加。 但是过高温度会分解多糖，多糖的活性受到影 响，所以我们选择 90℃ 作为我们的浸提温度。 浸提 料液比对多糖提取率的影响 由表 2表 22可知，固定浸提时间为 ，浸提温度为 90℃ 不变。 料液比分别 1: 1: 1: 1:50、 1:60、 1:70。 根据 ，结果如下：。