高二生物多聚酶链式反应扩增dna片段

高二生物多聚酶链式反应扩增dna片段内容摘要：

的是 ( ) A． DNA聚合酶不能从头开始合成 DNA， 只能从5′ 端延伸 DNA链 B． DNA复制不需要引物 C． 引物与 DNA母链通过碱基互补配对进行结合 D． PCR扩增的对象是氨基酸序列 【尝试解答】 __C__ 例 1 【 解析 】 由于 DNA聚合酶不能从头开始合成DNA， 只能从 3′ 端延伸 DNA链 ， 故 DNA复制需要引物 ， 而且它与 DNA母链通过碱基互补配对结合。 PCR扩增的对象是 DNA， 而不是氨基酸。 【 探规寻律 】 (1)引物是一小段 DNA或 RNA， 它能与 DNA母链的一段碱基序列互补配对。 包括引物 Ⅰ 和引物 Ⅱ 两种。 用于 PCR的引物长度通常为20～ 30个核苷酸。 (2)细胞内 DNA复制与 PCR技术的原理和过程容易发生混淆，特别应注意区分 PCR反应需要可变的温度，而体内 DNA复制需要稳定的温度。 跟踪训练 (2020年海淀区高二检测 )关于 DNA片段 PCR扩增实验的描述中不正确的是 ( ) A． 加入的 Taq DNA聚合酶耐高温 B． 不同大小 DNA在电场中迁移速率不同 C． 此过程需要 DNA连接酶 D．扩增区域由两种引物来决定 解析： 选 C。 PCR扩增实验是在较高温度下进行的 ，故需要耐高温的 Taq DNA聚合酶 ， 但不需要 DNA连接酶 ， A项正确 ， C项错误。 因为不同大小的DNA带有不同数量的电荷 ， 所以在电场中迁移速率不同 ， B项正确。 PCR扩增需要两种引物 ， 分别与 DNA的两条模板链互补 ， 则 D项正确。 PCR反应的实验操作过程 1． 反应体系的配方 10倍浓缩的扩增缓冲液 5 μL 20 mmol/L的 4种脱氧核苷酸的等量混合液 1 μL 20 μmol/L的引物 Ⅰ μL 20 μmol/L的引物 Ⅱ μL H2O 28～ 33 μL 1～ 5 U/μL 的 TaqDNA聚合酶 1～ 2U 模板 DNA 5～ 10 μL 注： ① 总体积 50 μL， ② 模板 DNA的用量在 1 pg～ 1 mg之间 (1)PCR仪： PCR自动化程度较高，参照下表设计程序即可。 循环数 变性 复性 延伸 预变性 94 ℃ ， 5 min － － 30次 94 ℃ ， 30 s 55 ℃ ， 30 s 72 ℃ ， 1 min 最后一次 94 ℃ ， 1 min 55 ℃ ， 30 s 72 ℃ ， 1 min 若无 PCR仪 ， 可用恒温水浴锅代替 ， 三个恒温水浴锅的温度分别为 94 ℃ 、 55 ℃ 和 72 ℃ ， 然后按照上表要求 ， 在三个水浴锅中来回转移 PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：一种薄壁塑料管 ， 总容积为 mL。 (3)微。