基因工程考试重点

基因工程考试重点内容摘要：

lac 操纵子的诱导物，也是作用的底物。 异丙基 βD 硫代半乳糖苷（ IPTG）是乳糖的衍生物，可作为 lac 操纵子的诱导物，但不能作为反应的底物； 5溴 4氯 3吲哚 βD半乳糖苷（ Xgal） 可作为 lac 操纵子的底物，但不能作为诱导物。 底物 Xgal 还可充作生色剂，被 β半乳糖苷酶分解后可产生兰色产物，可使菌落或噬菌斑呈兰色。 噬菌体载体 发育调节：吸附，侵入之后立即早期转录， ，延迟早期转录，溶原和裂解的感染分化，进入裂解生长，溶原化。 克隆的步骤：通过裂解过程 增殖载体；载体与外源 DNA 的酶切；外源 DNA 与载体的连接；重组噬菌体的体外包装【可制备噬菌体包装蛋白（衣壳蛋白）】；包装噬菌体颗粒的感染；筛选。 Pfu:噬菌斑形成单位，每微克包装入 DNA 感染大肠杆菌后形成的噬菌斑数，要求 106 以上。 的包装能力 （一）克隆载体 克隆载体主要用于扩增或保存 DNA 片段，是最简单的载体。 （二）穿梭载体 ： 是指具有多个复制子能在两个以上的不同宿主中 复制、增 殖 、选择 的载体。 (三 )表达载体 是指能 将目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生产的载 体 . 第四章 （ ColE1）、 抗性标记（ 氨苄青霉素抗性标记 ） 、 cos 位点。 2. YAC 载体的复制元件 是其核心组成成分，其在酵母中复制的必需元件包括复制起点序列即自主复制序列（ ARS）、用于有丝分裂和减数分裂功能的着丝粒 （ CEN）和两个端粒（ TEL）。 YAC 载体为能够满足自主复制、染色体在子代细胞间的分离及保持染色体稳定的需要，必须含有以下元件： （ 1） 端粒重复序列 （ TEL）： 定位于染色体末端一段序列，用于保护线状的 DNA 不被胞内的核酸酶降解，以形成稳定的结构。 （ 2） 着丝粒 （ CEN）： 有丝分裂过程中纺锤丝的结合位点， 使染色体在分裂过程中能正确分配到子细胞中。 在 YAC 中起到保证一个细胞内只有一个人工染色体的作用。 （ 3） 自主复制序列 （ ARS）： 一段特殊的序列，含有酵母菌中 DNA 进行双向复制所必须的信号。 （ 4） 标记基因 （主要采用营养缺陷型基因） —— YAC 载体主要是用来构建大片段 DNA 文库，特别用来构建高等真核生物的基因组文库，并不用作常规的基因克隆。 —— YAC 载体功能强大，但有一些弊端。 这主要表现在 3 个方面：首先，在 YAC 载体的插入片段会出 现缺失 （ deletion） 和基因重排 （ rearrangement） 的现象。 其次，容易形成嵌合体。 最后， YAC 染色体与宿主细胞的染色体大小相近，影响了 YAC 载体的广泛应用。 但是 YAC 的一个突出优点是，酵母细胞比大肠杆菌对不稳定的 、重复的和极端的 DNA 有更强的容忍性。 3. BAC 载体的复制单元 主要包括 oriS、 RepE(控制 F 质粒复制）和 parA、 parB、 parC（控制拷贝数）等成分 .所用的标记基因为氯霉素抗性基因。 它所装载的是大片段DNA。 B。