973项目标书医学部分

973项目标书医学部分内容摘要：

易感性中的作用及其机制。 2） RA 特征性 SNP 的分布研究。 2．前期组学筛选基础上，候选 RA 易感 CNP 及其致病机制研究 3． RA 相关基因表达差异的研究 4． RA 特征 miRNA 分布及早期诊断靶标研究 5. 血清生物标志分子及 RA 相关多肽做为早期诊断靶标的实验研究 1）双向电泳 血清蛋白质谱鉴定 18 2）血清蛋白指纹图谱的鉴定及早期诊断靶标的实验研究 3）新型自身抗体筛查研究 经费比例： 15% 承担单位： 山东省医学科学院、北京大学 课题负责人： 常晓天 学术骨干： 崔亚洲、潘继红、李茹、安媛、刘栩、赵燕 课题 RA 干预新策略的研究 预期目标： 探讨针对 RA 发病不同环节的免疫干预新方法在胶原性关节炎的作用，为RA 免疫干预新策略研究提供实验依据。 研究内容： 本课题将在项目组成员既往研究以及本项目前述研究基础之上，针对 RA 自身免疫反应的启动、调控、炎症反应及骨破坏等四个关键环节，探索 RA 干预的新策略，并通过与传统缓解病变抗风湿药（ DMARDs）甲氨蝶呤比较，评价新型免疫治疗策略的疗效及安全性。 本课题的主要研究内容如下： 1. 阻断自身 免疫反应的激活治疗 RA 的实验研究 1） HLADRB1 特异性变构肽的优化和合成。 2）变构肽的体外筛选。 3） HLADRB1 特异性变构肽对 CIA 模型的抑制作用。 2. 新型免疫调节分子对 RA 自身免疫调控及治疗作用研究 1）娃 儿藤碱类似物的免疫调节机制及对 CIA 鼠关节炎的抑制作用研究。 2）组蛋白乙酰化酶抑制剂免疫调节机制及治疗作用研究。 3. RA 相关新型炎症靶点及其干预策略研究 1） 针对靶分子的序列特异性 siRNA 的设计和筛选。 2）合成的 siRNA 对 CIA 鼠模型的治疗作用研究。 4. 新型生物制剂对 RA 骨破坏的抑制作用研究 1） OPGHSP 重组蛋白对 RA 骨损伤和滑膜炎症的抑制作用研究。 2） RANKL TNF 样区疫苗对 RA 骨损伤和滑膜炎症的抑制作用研究。 19 3）抗 Cyr61 人源化单克隆抗体的制备及对 RA 骨破坏的抑制作用研究。 经费比例： 20% 承担单位： 首都医科大学、南开大学 课题负责人： 赵文明 学术骨干： 王鹏、王璞 玥 、李慎涛、沈杰、赵炜、王 炜 20 四、年度计划 第一年度 （一）研究内容 1． 筛选 RA 特异的相关抗原和表位，并制备相应的特异性抗体。 2． 合成 GlcNAc糖蛋白。 3． 进行 T 细胞糖表位特异性抗体的制备 ，试制糖表位抗体检测的 ELISA 试剂盒。 4． 分析早期 RA 患者滑膜组织与外周血中自身反应性 TCRV 亚家族的表达。 5． 分析不同抗原 T 表位排列方式对抗原性的影响。 6． T 细胞二个亚群（ Vγ1/Vγ4）产生 IFNγ 和 IL4 的分子机制研究。 7． 分析 RA 关节滑液中 Th17 和 Th1 炎性细胞亚群格局与相互作用。 8． 分析 RA 局部炎症与滑液中炎症因子对于滑膜细胞的作用，以及 RA 滑膜细胞所分泌的炎症因子对于 RA 中 Th1 和 Th17 细胞的抗凋亡作用。 9． 分析 RA 患者 FLS 中 Wnt/DKK 表达格局。 10． 分析 FLS 中 Wnt/DKK 不同分子对于 FLS 增殖活化的影响。 11． 析不同 Treg 对 T 细胞活化的抑制作用，从而评价不同 Treg 亚群对 CIA 免疫应答的调控作用。 12． 从细胞增殖、分化、细胞因子分泌等方面，探讨 MCSs 对淋巴细胞的分化的影响。 13． 对 RA 调控相关小分子在患者外周血的表达进行分析。 14． 对项目组前期发现的 RA 关联 SNP 进行进一步基因定位工作，并在大样本中验证。 同时进行高通量 RA 易感 SNP 的筛选，发现和鉴定新的 RA 关联基因。 15． 测定筛选出的变构肽对 RA 自身反应性 T 细胞活化的影响。 16． HDAC 同功酶的结构计算；合成首批分子。 17． 设计、合成、筛选，针对 RA 相关炎症新靶 点的特异性 siRNA。 18． OPGHSP 重组蛋白的原核表达、纯化、复性，大量制备。 19． 构建原核表达 RANKL TNF 样区多肽疫苗、 IL17RC 可溶性多肽。 20． 抗 Cyr61 人源化单克隆抗体制备。 21 （二）预期目标 1． 争取 获得多个 RA 相关的新的候选抗原和表位。 2． 研究可用于临床检测的 T 细胞糖表位特异性抗体 RA 诊断方法。 3． 阐明 RA 关节滑液中炎症细胞亚群及其炎症因子在 RA 滑膜炎症的早期作用及相互调控机制，筛选 RA 炎症细胞抗凋亡的调控机制和新分子。 4． 明确不同 Treg 亚群对 CIA 发病的不同调控作用。 5． 阐明 MSCs 对 RA 患者 T 细胞 功能的影响。 6． 了解 RA 相关小分子在 RA 患者外周血各免疫细胞亚群中的表达情况。 7． 争取筛选出新的 RA 关联基因；精确定位多个 RA 关联基因。 8． 力争获得与 HLADRB1 结合力更强，且能抑制 RA 自身反应性 T 细胞活化的新型变构肽。 9． 完成 ClassI， ClassIIa， ClassIIb 和 ClassIV 的代表性 HDAC 同功酶的同源模建和结构优化工作。 10． 力争筛选出 针对 RA 相关炎症新靶点的特异性 siRNA。 11． 研究 OPGHSP 重组蛋白、 RANKL TNF 样区多肽疫苗、 IL17RC 可溶性多肽。 12． 争取获得人源化抗 Cyr61 抗体表 达克隆及稳定表达的关键技术参数。 第二年度 （一）研究内容 1． 利用制备的特异性抗体， 筛选 RA 自身抗原。 2． 合成双天线型寡糖分子。 3． 研究早期 RA 患者的主要 T 淋巴细胞。 分析不同 T 表位功能表达的构象条件，明确 T 细胞表位特异性应答与疾病相关性。 4． 糖表位特异性抗体和抗 T 细胞抗体作用于 RAT 细胞后导致其表型和功能变化的体外实验。 5． RAT 细胞表面抗原性的特点分析。 6． 用 Vγ1 或 Vγ4 特异性抗体对相应的 T 细胞进行体内清除，观察 Vγ1 或Vγ4T 细胞对关节炎的影响。 22 7． 明确炎症因子 IL17 和相关炎症因子对 Cyr61 表达 的影响和参与滑膜细胞过度增生的作用。 8． 分析 FLS 中 Wnt/DKK 不同分子对于 FLS 增殖活化的信号调控途径。 9． 分析 Cyr61 和 Wnt/DKK 对于滑膜细胞 MMPs 表达格局及影响。 10． 研究特定亚群 Treg，对 CIA 模型的关节炎形成、体内自身抗体的产生及组织病理改变的作用。 11． 利用 IL10/Foxp3 Tg 小鼠 CIA 模型，探讨 MSCs 对小鼠 CIA 发生发展的预防和治疗作用。 12． 上调或下调 RA 相关小 分子的表达，分析其对各种免疫细胞活化及分化功能的影响。 13． 筛选 RA 易感 CNP。 14． 对筛选出的变构肽进行豆蔻酸化修饰、鉴定。 15． 进行 首批 HDACi 分子的生物学测试。 16． 对筛选出的 RA 相关炎症新靶点的特异性 siRNA 进行化学修饰 、 鉴定；同时用其转基因小鼠建立 CIA 模型。 17． 探讨 OPGHSP 重组蛋白、 RANKL TNF 样区多肽疫苗对 CIA 模型的骨损伤防止作用和炎症反应的保护性作用。 18． 在细胞水平上，研究 IL17RC 可溶性多肽抑制 RANKL 及炎性细胞因子产生的生物学功能。 19． 抗 Cyr61 人源化单克隆抗体制备。 （二）预期目标 1． 争取获得多个 RA 自身抗原。 2． 通过体外试验观察糖表位特异性抗体和抗 T 细胞抗体对 RAT 细胞的调节作用及其机制。 3． 通过体内试验 初步明确 γδT 细胞二个主要亚群在 RA 中的作用。 4． 明确 Th17 等细胞及其相关炎症因子对于 RA 滑膜炎症的作用与调控机制。 5． 分析出不同亚群 Treg 对关节炎的预防作用。 6． 评价 MSCs 对关节炎发生和发展的抑制作用。 7． 明确 RA 相关 小 分子在 RA 患者外周血各免疫细胞亚群中的功能。 23 8． 发现 RA 基因组中可能存在的 CNP。 9． 确定豆蔻酸化变构肽的免疫学功能。 10． 优化或完善小分子化合物，获得可选择性调控 Treg 亚群分化的系列最佳娃儿藤碱类小分子化合物。 11． 总结首批测试结果，建立初步的 RA 和 HDAC 相关性假说，并将该假说反馈回 HDACi 分 子的设计和合成。 12． 力争获得 12个经过化学修饰而提高体内稳定性及特异性的针对 RA相关炎症新靶点的 siRNA。 13． 获得利用 RA 相关炎症新靶点转基因小鼠建立的 CIA 模型，并了解其发病前后的各项免疫学指标。 14． 评价出 OPGHSP 重组蛋白疫苗对 CIA 鼠的疗效。 15． 阐明 IL17RC 可溶性多肽抑制骨破坏和炎症反应相关因子的生物学功能。 16． 获得能够稳定表达抗 Cyr61 人源化抗体的克隆。 第三年度 （一）研究内容 1． 检测 RA 自身抗原的修饰特点。 2． 进行寡糖分子库的合成，寡糖芯片的制备和测试。 3． 深入研究 RAT细胞免疫生物学特点。 4． 研究 RA患者血清中针对 RAT细胞的调节性抗体的滴度与抗原特异性。 5． 鉴定具有葡聚糖基化修饰的 RAT细胞膜翻转异位抗原。 6． 分离纯化 Vγ1 和 Vγ4 γδT 细胞，在体外扩增培养，转移至关节炎小鼠，观察不同亚群 γδ T 细胞对关节炎的调节作用。 7． 采用小鼠软骨细胞或成骨细胞培养系统，研究阻断 Cyr61 后对于成骨细胞生长与维持的影响。 8． 分析 Wnt/DKK 调控 βcatenin、 RANKL、 OPG 等的表达和对炎症因子产生能力和对于成骨细胞生长的初步影响。 9． 利用从 IL10/Foxp3 Tg 小鼠获得的不同亚群 Treg细胞，探讨不同亚型 Treg对 CIA 动物模型的治疗作用。 10． 分析 RA 患者外周血 Treg、 Th Th17 分布，探讨 Treg 分布变化与 Th24 Th17 分布的相关性。 11． 检测 MSCs 治疗 CIA 模型 IL10/Foxp3 Tg 小鼠血清细胞因子水平，并分离小鼠脾细胞，分析各 T 细胞亚群的数量、细胞表型及体外活化功能。 12． 采用基因表达芯片比较上调或下调 小分子 表达后， 其在 相应免疫细胞表达谱的差异，寻找差异表达的 RA 相关小分子。 13． 对上述研究中发现的 RA 关联基因和 CNP 的作用机制进行研究。 14． 使用前述经优化设计并筛选出的变构肽对 HLADRB1转基因小鼠的 CIA模型进行治疗，综合评价其治疗效果。 15． 检测小分子化合物对 CII 免疫后不同阶段 CIA 小鼠中 Treg 亚群数量，格局和功能的改变。 16． 优化 HDAC同功酶的结构，预测 HDAC与先导 HDACi分子的结合模式；合成第二批 HDACi分子。 17． 利用 siRNA 检测下调 RA 相关炎症新靶点对 RA 细胞炎性反应及自身抗原的免疫反应的作用。 观察其 siRNA 对 CIA 的治疗效果及对小鼠的影响。 18． 体外实验研究 OPGHSP 重组蛋白防治骨破坏和抑制炎症反应的作用机制。 19． 探讨 RANKL TNF 多肽疫苗发挥保护性效果的作 用机制。 RANKL TNF 样区表位的筛选。 20． 制备足量抗 Cyr61 人源化单克隆抗体，并用于小鼠 CIA 模型和体外细胞实验体系的治疗实验 （二）预期目标 1． 阐明获得的修饰抗原是否具有特异的修饰以及相应的修饰特点。 2． 系统分析其 TCR 特异性、表达水平以及 ZAP70 等信号途径改变。 3． 明确 RA 患者体内糖表位特异性抗体和抗 T 细胞抗体与疾病的相关性。 4． 成功鉴定 RAT 细胞膜表面葡聚糖基化修饰的膜翻转异位抗原。 5． 了解不同亚群 T 细胞对关节炎的调节作用。 6． 明确 Th17 及其相关调控因子如 Cyr61 和 Wnt/DKK 对于 RA 滑膜炎症和引起 骨质破坏的现象。 7． 分析出不同亚群 Treg 对关节炎的治疗作用。 8． 阐明调节性和致病性 T 细胞之间比例失衡在 RA 发病机制中的作用 25 9． 分析间充质干细胞对 T 细胞调控作用机制。 10． 明确差异表达的 RA 相关小分子 ，并预测出 可能的 作用靶点。 11． 力争筛选出多个 RA 关联基因和 CNP，阐明其致病机制。 12． 确定经前述筛选获得的变构肽对 CIA 的实际治疗效果。 13． 明确不同亚群 Treg 细胞对初次和再次免疫应答的调控作用研究，及在。