乙肝表面抗原的elisa法定量分析方法学验证毕业论文(编辑修改稿)

乙肝表面抗原的elisa法定量分析方法学验证毕业论文(编辑修改稿)内容摘要：

PBS 取 剩余（ ul） 标记 （ ul） C1 6 150 标准品 450 C2 3 300 C1 300 300 C3 300 C2 300 300 前言 5 空白对照加入 1 PBS缓冲液。 表 3 铺板方案 ．加样步骤 加入酶标抗体， 50 ul/well，震荡。 37℃电热恒温培养箱温育 60min，取出后洗板 4次， 加入 A、 B液 , 50 ul/ well， 37℃电热恒温培养箱温育15 min。 加入终止液， 50 ul/ well。 酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上打开 Microplate Manager ，选择 450nm波长（参照波长630nm），设置 LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值。 2. 结果 标准曲线与线性范围 标准品理论浓度对应的实测 OD值 表 4 实测 OD值 HBsAg(ng/ml) 8 4 2 1 OD 以 HBsAg理论浓度为横坐标，所测 OD值为纵坐标作图，绘制标准曲线观察线性关系，结果显示 R2=，显示具有良好的相关性 1 2 3 4 5 A S1 C1 C2 C3 PBS B S2 C1 C2 C3 PBS C S3 C1 C2 C3 D S4 C1 C2 PBS E S5 C1 C3 PBS F S6 C2 C3 PBS 前言 6 0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 . 00 . 51 . 01 . 52 . 0y = 0 . 1 8 1 6 X + 0 . 2 3 0 7 R2 = 0 . 9 9 7 3C o n c ( n g / m l )Absorbance(OD) 图 1 线性关系图 准确度（回收率）的验证 质控品理论稀释浓度对应实测浓度值 表 5 实测浓度值 HBsAg (ng/ml) 测定值 1 2 3 4 5 6 3 质控品做了 3个浓度梯度，每个浓度做了 5个复孔，下表是对每个浓度梯度进行准确度（回收率）的验证。 表 6 准确度的验证 HBsAg (ng/ml) 测定值（ ng/ml） 回收率（ %） 平均回收率 RR（ %） 3 个浓度的平均回收率 6 前言 7 3 % 结果显示 HBsAg 6ng/ml和 3ng/ml的平均回收率为 %，%，满足限度要求在 85%115%的范围内，而 HBsAg 的平均回收率为 %，满足方法定量限在 80%120%的范围内。 3个浓度梯度的平均回收率为 %，显示准确性好。 精密度的验证 板内 精密度的验证 表 7 板内精密度的验证 HBsAg (ng/ml) 测定值 XS RSD(%) 1 2 3 4 5 6 177。 3 177。 177。 上表中 RSD(%)这一参数表示相对标准偏差，也就是变异系数 CV值， HBsAg 6ng/ml的 5个复孔的变异系数 CV值为 %，显示孔间差异较大，精密度不高，但是也符合 ng/ml级 RSD水平的一般应 15%的要求，其中有一孔浓度为 ，与其它孔比较差异较大，可能是由于操作引起例如加样不准。 而 3ng/ml,和 ，%，符合显示孔间重复性好，符合 ng/ml级 RSD水平的一般应 15%前言 8 的要求，精密度高。 板间精密度的验证 从同一实验室中获取 2组同样的数据，做板间精密度的验证。 首先对同一实验条件下不同实验人员所获得的数据是否可用于板间分析做验证。 表 8 板间精密度的验证 HBsAg(ng/ml) 8 4 2 1 第二组 OD 值 第三组 OD 值 以 HBsAg理论浓度为横坐标，所测 OD值为纵坐标作图，绘制标准曲线观察线性关系。 0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 . 00 . 5. 01 . 52 . 02 . 5第三组第二组R 2 = 0 . 9 9 1R 2 = 0 . 9 6 7C o n c ( n g / m l )Absorbance(OD) 图 2 线性关系曲线 以上标准曲线结果显示第二组数据的 R2 =，第三组数据 R2 =。 第二组数据由于有一些孔与标准曲线偏离较大，但考虑到随机抽样与均数存在一定误差，还是可以用于统计学分析。 下表对 3组前言 9 数据做板间分析。 从表中 3个组的数据比较可知， HBsAg 6ng/ml和 3ng/ml的 RSD分别为 %， %，满足对 ng/ml级水平的 RSD一般应 15%的要求，精密度高。 而 HBsAg ，不满足 ng/ml级水平的 RSD一般应 15%的要求，显示低浓度的孔间重复性差，精密度不是很高，故以下对 HBsAg理论浓度为。 对 HBsAg理论浓度为 ，精密度分析 表 9 精密度分析 HBsAg (ng/ml) 测定值（ ng/ml） 回收率（ %） 平均回收率 RR（ %） SD% CV% 第一组数据 ng/ml 第二组数据 ng/ml 第三组数据 HBsAg (ng/ml。