沙门菌检验技术和方法(编辑修改稿)

沙门菌检验技术和方法(编辑修改稿)内容摘要：

BS）：含有煌绿、亚硫酸铋能抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的生长，但对伤寒、副伤寒等沙门菌的生长无影响。 伤寒杆菌及其他沙门菌能利用葡萄糖将亚硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色菌落周围绕有黑色和棕色的环，对光观察可见有金属光泽。 该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性，应在临用时配制，超过 48h不宜使用。  沙门菌的菌落形态：产 H2S的菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色。 菌落周围培养基可呈黑色或棕色，有些不产 H2S的菌落，形成灰绿的菌落，周围培养基不变。 注：此培养基在制作过程中过分加热可使培养基的选择性降低，与 TTB或 SC合用可获得更高的检出率。 沙门菌的分离培养基  HE琼脂：在保证细菌所需营养的基础上，加入了一些抑制剂，如：胆盐、柠檬酸盐、去氧胆酸钠等，可抑制某些肠道致病菌和革兰氏阳性菌的生长，但对革兰氏阴性的肠道致病菌则无抑制作用。  沙门菌在 HE琼脂上的菌落形态：蓝绿色或蓝色，多数菌株产 H2S，中心呈黑色或几乎全黑色。 沙门菌的分离培养基  XLD琼脂：培养基中含有去氧胆酸钠作指示剂，在该浓度下的去氧胆酸钠也同时作为大肠埃希氏菌的抑制剂 ，而不影响沙门菌属和志贺菌属的生长。  XLD培养基分离沙门菌和志贺菌的敏感性超过了传统的培养基，如： EMB、 SS、 BS。 因这些培养基尚有抑制志贺菌属生长的潜在因素，故本培养基是分离鉴定沙门菌及志贺菌属的可靠培养基。 在国外广泛使用。 分离培养中的注意要点  非典型的沙门氏菌菌落形态：不存在典型的或可疑的沙门氏菌菌落时，按如下步骤检验非典型的沙门氏菌菌落。  HE和 XLD琼脂：非典型的沙门氏菌在 HE和XLD琼脂上呈黄色菌落，带或不带黑色中心。 HE和 XLD平板经 24177。 2小时培养后，没有典型的沙门氏菌菌落，则挑取 2个或更多个非典型的沙门氏菌菌落。  BS琼脂：某些非典型菌株产生绿色菌落，其周围培养基稍微或不呈暗色。 如果 BS平板培养 24177。 2小时后，没有出现典型菌落，则不挑取任何菌落，让平板继续培养 24177。 2小时。 如果经 48177。 2小时培养后，仍没有典型或可疑的菌落出现，则挑取 2个或更多个非典型的菌落。 沙门菌显色培养基  沙门菌显色培养基主要用于快速筛选、分离沙门菌。 其基本原理：利用沙门菌特异性酶与显色基团的特有反应，使色原游离出来，沙门菌在培养基上呈紫色或紫红色。 而大肠杆菌等其他肠道杆菌呈蓝绿色。 色原 特定结合物 色原＋特定结合物 沙门菌辛酸脂酶 无色 显色 游离 可疑菌落的生化鉴定  自选择性琼脂平板（至少 2种选择性平板）上直接挑取 2个以上可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂 (TSI)。  TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亚铁铵、硫代硫酸钠、酚红、琼脂。  在 TSI琼脂中有 2个指示剂体系：  酚红 :在碱性环境中呈红色；在酸性环境中呈黄色。  硫酸亚铁铵：是硫化氢的指示剂，可与硫化氢反应生成硫化铁呈黑色。 硫代硫酸钠可防止硫化氢氧化形成 SS基而影响反应。 沙门菌在 TSI琼脂上的反应 斜面 底层 产气 H2S 可能的菌属和种 – + +/– + 沙门菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌 + + +/– + 沙门菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌 – + – – 伤寒沙门菌、鸡沙门菌、志贺菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 – + + – 沙门菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属 + – + – +/– – – – 非沙门菌 赖氨酸脱羧酶试验  赖氨酸脱羧酶试验培养基：蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、溴麝香草酚蓝（紫）。  原理：细菌使氨基酸脱羧，产生胺类，使培养基变碱，颜色不改变。  沙门菌的反应：阳性。  意义：柠檬酸杆菌、志贺菌 均为阴 性；埃希氏菌不定。 注：本试验的阳性反应为培养基不改变颜色 ,而培养基变黄色者为阴性反应。 本试验一定要设空白对照。 培养基需用液体石蜡封 盖，阻止空气的氧化作用。 靛基质试验  靛基质试验的培养基：蛋白胨水。  原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基质，与对二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。  沙门菌的反应：可以阳性或阴性反应。 尿素酶试验  尿素培养基：蛋白胨、葡萄糖、酚红、氯化钠、磷酸二氢钾、尿素，。  原理：含尿素酶细菌能分解尿素，产生大量的氨，使培养基呈碱性，指示剂变红。  沙门菌的反应：阴性。 氰化钾试验  氰化钾试验培养基：蛋白胨、磷酸盐缓冲对、氯化钠、氰化钾。  原理：氰化钾是剧毒药物，可抑制某些细菌的呼吸酶系统，使这些酶失去活性，细菌的生长因此受到抑制。 而某些细菌可对氰化钾产生抗性，能在氰化钾培养中生长。 本试验常用于沙门菌与柠檬酸杆菌的鉴定。  沙门菌生长情况：阴性（不生长）。  注：本试验必需设置对照管（不加氰化钾），若对照管细菌生长良好，试验管细菌不生长，可判定为阴性。 若对照管与试验管均无细菌生长，则应重复试验。 试验失败的主要原因是封口不严，氰化钾逐渐分解，生成氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低细菌生长，呈假阳性反应。 沙门菌生化鉴定培养基 β半乳糖苷酶 (ONPG)试验  β半乳糖苷 (ONPG)培养基：蛋白胨、ONPG。  原理：大肠杆菌含有 β半乳糖苷酶，能分解 ONPG，使培养基呈黄色。  沙门菌的反应：阴性。 注：本试验主要用于不产 H2S的沙门菌与大肠杆菌的判定 沙门菌生化鉴定的主要试验项目  糖发酵试验：三糖铁琼脂 (葡萄糖、乳糖、蔗糖 )、甘露醇、山梨醇、卫茅醇、水杨苷、ONPG。  氨基酸和蛋白质代谢试验：靛基质、赖氨酸脱羧酶、尿素酶。  碳源和氮源利用试验：丙二酸盐。  其他生化试验：氰化钾。 沙门菌在 API 20E的典型反应 第 1位数 第 2位数 第 3位数 第 4位数 第 5位数 第 6位数 第 7位数 结果判。