家蚕核型多角体病毒lef-11与宿主相互作用项目申请书(编辑修改稿)

家蚕核型多角体病毒lef-11与宿主相互作用项目申请书(编辑修改稿)内容摘要：

pression and localization of LEF11 in Autographa californica nucleopolyhedrovirusinfected Sf9 cells. J Gen Virol, 20xx. 82(Pt 9): p. 228994. 7. Lin, G. and . Blissard, Analysis of an Autographa californica nucleopolyhedrovirus lef11 knockout: LEF11 is essential for viral DNA replication. J Virol, 20xx. 76(6): p. 27709. 8. Zhang, J., et al., Inhibition of BmNPV replication in silkworm cells using inducible and regulated artificial microRNA precursors targeting the essential viral gene lef11. Antiviral Res, 20xx. 104: p. 14352. 项目的研究内容、研究目标 ,以及拟解决的关键问题。 研究内容 西南大学基本科研业务费专项资金项目计划任务书（学生项目） 7 1） LEF11 核细胞定位研究 通过免疫荧光技术鉴定家蚕 核型多角体病毒 LEF11 蛋白定位在细胞核内，利用 BrdU 标记技术确定其定位于宿主细胞 DNA 复制中心。 2） LEF11 免疫共沉淀研究 通过过表达 LEF11,利用 免疫共沉淀和质谱分析 技术，分析过表达后对宿主 蛋白表达 的影响。 3） LEF11 相互作用蛋白研究 通过 免疫荧光共定位 LEF11 与筛选的宿主蛋白并通过免疫共沉淀等试验技术 鉴定与 LEF11 相互作用蛋白。 研究目标 1）鉴定 LEF11 核定位 ，分析其定位位置。 2）揭示 LEF11 过表达对宿主细胞 蛋白表达的影响。 3）通过筛选与 LEF11 相互 作用蛋白，鉴定 LEF11 与宿主相互用蛋白。 拟解决的关键问题 鉴定 lef11 基因 与宿主细胞相互作用蛋白。 拟采取的研究方案及可行性分析。 1） BmNPV LEF11 蛋白核定位信号鉴定 利用 LEF11 抗体免疫荧光分析 LEF11 蛋白亚细胞定位，同时借助 BrdU抗体对 LEF11 在细胞核内进行精细定位 ； （ 该部分研究内容已完成 ） 2） BmNPV LEF11 蛋白 过表达对宿主细胞 蛋白表达影响 ① 利用 LEF11 蛋白过表达后 ， 以 LEF11 为诱饵蛋白， 通过检测蛋白条带变化鉴定宿主细胞蛋白表达量差异的 变化。 ②通过质谱分析筛选与 LEF11 相互作用的宿主蛋白。 3） lef11 基因 相互作用蛋白研究 通过免疫 荧光 和 免疫共沉淀 技术， 验证与 LEF11 共定位的宿主蛋白及相互作用的蛋白。 （ 2） 技术路线 西南大学基本科研业务费专项资金项目计划任务书（学生项目） 8 本项目的技术路线如下图。 (3)关键技术 1) 免疫共沉淀技术。 它决定了是否可以找到 LEF11 互作的宿主蛋白，是研究 lef11 基因对宿主细胞调控的前提条件； 2) 稳定高效的家蚕基因过表达技术。 它决定了目标基因过表达的效率，是基因功能研究的控制性因素。 项目承担单位已经建立了以上关键技术的技术平台，并能熟练运用以上 技术。 同时，以上关键技术所涉及的仪器本单位都能提供和满足。 （ 4）可行性分析 1） 在前期研究中，我们已经建立了高效 蛋白相互作用研究 平台。 （相关数据已经发表在病毒学权威杂志 Virus Research 上）。 同时，我们对 LEF11 核定位机制的研究也为此项目继续深入鉴定基础 （相关数据已经发表在病毒学权威杂志Virus Research 上）。 本项目 选题既有理论意义，又有应用价值， 研究方案切实可行，技术路线合理，所用实验技术方法先进，能够按期完成预定研究任务。 2） 本项目承担单位为 “家蚕基因组学国家重点实验室 ”，本 实验室完成了家蚕全基因组测序 和 家蚕 EST 数据库构建，可为项目的实施提供了信息的支撑；西南大学基本科研业务费专项资金项目计划任务书（学生项目） 9 本研究室有强大的基因组信息分析平台、家蚕细胞系平台、蛋白。