制剂药学研究的技术要求(doc25)-医药保健(编辑修改稿)

制剂药学研究的技术要求(doc25)-医药保健(编辑修改稿)内容摘要：

符合规范化要求。 薄层鉴别试验必需注意目的性、针对性、重现性和准确性。 供试液的制备不仅要考虑多种药味所含成分的相互干扰和影响 ，还要考虑到不同工艺和不同剂型各自的特点，譬如一个制剂中含人参同时又含有黄芪，在设计人参皂甙薄层鉴别时就应考虑到黄芪皂甙对它的影响，不论在供试液制备还是展开剂的选择都要考虑周到。 有些药味所含的甙类成分种类既多，极性又大，经多种条件均很难展开分离时，也可考虑用水解后鉴别甙元的办法。 如在多味药材组成的复方制剂中含人参皂甙的药材不少，有的品种由于众多成分的严重干扰，鉴别人参皂甙确有困难时，可采用水解后鉴别人参二醇或人参三醇的办法。 但这只能说明在该品种中含有人参皂甙类的成分，不能说明其含何种人参皂甙，所以一般不应作 为首选的方法。 不同剂型所加添加剂也互不相同，供试液的制备就不可能用同一种方法，如口服液或糖浆剂既是液体制剂，又含有较大量的糖，供试液的制备就不应完全照搬不加糖的固体剂型（如片剂），这时萃取方法固然不同，而且除糖也就成为供试液制备要考虑的主要问题。 供试液的制备可采用传统的液液萃取的方法，也可采用固液萃取的方法，而且后者的优点更多，也更方便。 固液萃取所用的介质 中国最大的管理资源中心 第 10 页 共 24 页 常见的有硅烷基化硅胶（ C－ 18）小柱、硅胶小柱、氧化铝小柱、大孔树脂柱、离子交换树脂柱、硅藻土小柱等，可以有选择的使用。 试验设计应有对照品及对照药材， 并需作阴性对照（即除去欲鉴别的药味的 阴性 对服液）。 实验条件应有二个以上不同选择性的展开剂，如均能证明供试品中的欲鉴别成分与对照品的层析行为一致，再从中选取较好的条件列入质量标准的正文中．如用对照药材，要求供试品的色谱与对照品的色谱的主要斑点能一致。 因为样品供试液中还有其他药味，不可能与单一的药材的色谱完全一致，因此应反复试验，仔细比较，以便作出准确的判断。 气相色谱适宜于制剂中含有挥发性成分的药材的鉴别，如冰片、薄荷、麝香（麝香酮），丹皮（丹皮酚），以及以挥发油为主的药油类制剂。 有的是结合含量测定项目 进行。 如样品中含有多种挥发油，需注意色谱的分离度能将各主要组分分开，以免作出模糊的或错误的判断。 设计试验时，应注意制剂的生产工艺，如有的药材虽然含有挥发油，但是如果采用的水煮工艺，则挥发油基本上提取不出来，这就不宜再对成品中该药材的挥发油进行鉴别。 如以出峰的相对保留时间作为鉴别特征时，必须提供气相色谱中的该峰的特征参数，确证无误，方可成立。 高效液相色谱很少直接用于中药制剂的鉴别，如果含量测定采用了高效液相色谱法，则可在含量测定项目的进行中考察可否间接地用于定性鉴别。 尤其在用其他鉴别手段均无效时，可以考虑 采用。 设计试验时也同样要注意色谱条件的优化和方法学验证。 附：薄层色谱规范化的基本技术要求 由于中药材及中药制剂的鉴别采用薄层色谱法比较普遍，为了提高试验的重现性及分离度，下列的技术要求可作为设计和进行薄层色谱试验时的参考。 薄层色谱的规范化技术要求 ① 仪器与材料 A 薄层板 可用手工自制板或预制板，用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁，平整，最好使用厚度为 l2mm 的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层极，玻璃板需用洗液或碱液洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用；反复使用时应注意需再 用洗液或碱液清洗，如选用预制板应注意生产厂家提供的有关参数，挑选，检查并试用是否符合要求。 最常用的吸附剂通常是加有石膏作粘合剂的商品硅胶 G，或加有荧光剂的硅胶 GF254，有的另加其他粘合剂如羧甲基纤维素钠以加固薄层板面；为了达到更好的分离的品种要求使用加有酸（如硼酸），碱（加氢氧化钠）或缓冲溶液等薄层板。 不同生产厂家或不同批次的商品硅胶质量不可能完全相同，常常会影响分析结果的重现性，在重复实验时尤须注意、硅胶 G 因长期贮放可能使粘合力降低，薄层厚度一般为 250～ 300μm ，有的品种也使用纤维素板、氧化铝板 或聚酰胺板。 B 涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 商品有手工、半自动及自动薄层板涂布器。 涂布的厚度有固定厚度（如 250μm ）或可以调节的两种。 C 点样器材： 中国最大的管理资源中心 第 11 页 共 24 页 最常用也最方便的是定量点样毛细管（微升毛细管），规格有 ， 、 、 、 、 及 10ul 等。 对点样用的微升毛细管的要求是标示容量准确，管端平整光滑，管壁洁净，液流通畅，无堵塞，无污染，商品最常用的是 Drummond Scientific Co．（美国）的产品，也可选用 色谱用微量注射器（应选用针尖平头适合薄层点样的）。 为了提高点样效率，还可选用点样辅助设备，如点样支架，半自动或自动点样器。 选用点样器材和辅助设备应注意器材本身的质量。 D 展开箱（层析缸） 应当用薄层色谱专用的展开箱，有平底展开箱和双槽展开箱，还有一种水平式展开箱。 双槽展开箱具有节约溶剂、减少污染、便于预平衡及控制展开条件等优点。 水平式展开箱可以从薄层板的两侧向中间展开，展距 5cm（特别是高效薄层板），所以一块薄层板所承受的样品个数比常规上行法展开增加了一倍。 用不合格的玻璃器皿如生物标本缸等不能 保证展开的质量。 E 显色与检测仪器 薄层极展开后，有的需用试剂（显色剂）显色。 涂布显色剂有喷雾法和浸渍法。 喷雾瓶应能在一定压力下使试剂喷成均匀的细雾状。 薄层扫描定量测定，显色剂可控制喷洒的数量和喷雾的压力。 浸渍法用浸渍槽为特制的浸渍槽，将展开后的薄层板平稳放入有显色剂的浸渍槽中数十秒至 1 分钟后取出（指净薄层板背后的残存试剂）显色。 浸渍槽可用适当的玻璃器皿代替。 紫外光灯有长波段（ 365nm）和短波段（ 254nm）紫外光管，前者用于观察具有荧光的色谱，后者一般用于观察硅胶 GFS254板色谱在薄层板面的 荧光背景下出现的暗蓝紫色吸收斑点，选用紫外光灯应注意荧光管的功率和滤光片的性能。 薄层扫描仪不仅可以进行原位定量，薄层扫描全图谱对定性鉴别也能提供有用的信息。 ② 操作方法 A 薄层板的制备 除另有规定外，将 1 份吸附剂（如硅胶 G）加 3 份左右的水在研钵中用研杵沿一个方向充分研磨，调成均匀糊状物，倒入已准备好的涂布器中，在玻板上平稳地以直线方向移动涂布器，使硅胶浆均匀地涂布。 须注意的是不同厂家不同批号的硅胶 G 加水量及研磨时间要求有所不同，如加有其他改性剂更是如此。 薄层厚度一般为 ～，由于国产 常用的硅胶颗粒大小分布范围较宽（ 10～ 40μm ），如果颗粒分布不够均匀，而粗颗占比例较多时，涂布的太薄反而降低分离能力，有的品种，如人参甚至要求用 薄层板。 涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干，再在 105～ 110℃ 活化约 30分钟，置干燥器中备用。 使用前应在反射光和透射光下检查板面及纹理是否均匀，如不均匀，有气泡或有麻点、有破损或已污染（如灰尘、纤维）者应弃去不用。 预制薄层板分常规薄层板及高效板两种，由于商品供应来源不一，需注意并记录生产厂家及生产批号，必要时需测定板效，以保证较好的重现性。 在质量 保证的前提下，应尽量选用预制薄层极，以提高时效和色谱的重现性。 B 点样 中国最大的管理资源中心 第 12 页 共 24 页 除另有规定外，点样用的定量微升毛细管（或其他符合要求的点样工具）按规定吸取溶液后，以垂直方向小心接触板面使成圆点状，点样基线与底边的距离，视所用板的大小而定，如采用长度为 10cm 的板，点样距离底边以 1cm 为宜，点间距离视情况为 或 2cm，原点直径应不大于 3mm；如样品容量较大，或为了改善分离度，也可点成宽约 2～ 3mm 不同长度的条带。 点样时须注意尽量不要损害薄层表面。 一般的自制硅胶 G薄层板，板面的牢度不够，定量测定时需特别注 意小心点样，不要使原点部分的板面破损。 C 展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约 5mm，展开至规定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。 多数品种展距 7～9cm 已够，少数需用长度为 15或 20cm 的板；展开可在 10cm 以上。 如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入适量的溶剂，如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡，如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄层板放入 箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开。 展开剂要求新鲜配制，如需分层则按规定要求放置分层后，分取需要的一相（上层或下层）各用。 D 检测 色谱斑点本身有颜色者可直接在日光下观察色谱中的色斑，本身在紫外光激发下可发射荧光者可直接置紫外光灯下观察荧光色谱、需加试剂后方能显色或发射荧光者，则可将试剂用喷雾器均匀喷洒于薄层板面（或用浸渍法），再按规定直接观察或加热后观察。 浸渍法板面显色均匀是其优点，但有的样品经试剂浸渍后斑点容易被浸润扩散，则不适用。 涂布试剂后如加热显色需注意控制加热温度和时间 ，尤其含羧甲基纤维素钠的薄层板温度过高或加热时间过长易焦化，如用硫酸等试剂则可使板面碳化而影响显色效果；有的成分加试剂后加热温度和加热时间不同，显色效果可能有差别、有的品种用蒸气熏蒸（如碘蒸气）显色者，可在密闭器皿中放置适当时间至斑点显色清晰，薄层色谱还可在薄层扫描仪中进行光密度扫描或荧光扫描。 ③ 影响薄层色谱分析的主要因素 常规薄层色谱因为是一种 敞开系统 的色谱技术，与柱色谱的区别之一是除材料及器材以外，外界环境条件对被分离物质的层析行为影响很大，分离机制也很复杂；操作技巧也明显的影响色谱质量；为了 充分发挥薄层色谱技术在中药分析方面的优势，提高色谱的分离度和重现性，注意控制影响色谱质量的因素是非常重要的。 以下所述的几个方面不仅对定量分析是必须注意的问题，对提高定性分析的质量也是不可忽视的。 A．样品的预处理及供试液的制备 一般认为薄层色谱所用固定相（薄层板）可即用即弃，不怕供试液中杂质的污染，因而样品无需净化精制。 但在实践中，由于中药的成分复杂，未知成分多，供试液中溶出的物质较多，其中既有欲测成分也有其他 杂质。 常常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分高效果，甚至难以辨认，尤其成方制剂更是如 此．所以在许多情况下为了得到一个较为清晰的色谱。 样品提取物经预处理，使供试液得以净化，往往是一个重要的有时甚至是关键的步骤，制各样品供试液所用的溶剂一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸点适中；但中药制剂往往希望将各成分尽量多地提取出来，最常被选用的是甲醇或乙醇，欲测成分和许多其他 杂质 均可能被提取出来。 因此供试液的净化就显得更为必要。 样品供试液净化的方法通常有 1．单一溶剂萃取法， 2．分段萃取法； 3．液液萃取法； 4．固液萃取法。 中国最大的管理资源中心 第 13 页 共 24 页 B、薄层色谱的点样技术 点样是薄层色谱的第一步，也是关键的一步，它 既关系到能否得到可以重现的薄层色谱，也关系到定量测定结果的准确与否，因为不良的点样是测定误差的最主要的来源。 一般在常规薄层板上原点的直径不大于 3mm，高效薄层板要求原点直径不大于 2mm。 点样量不宜过大，最好控制在 10μl 以下，如在一个位置重复多次点样时，须注意尽量不将原点点成一个空心圈。 选用溶剂沸点不宜太高（如正丁醇）或太低（如己醚）。 如用乙醚提取，可将最终溶液改用其他非极性溶剂。 如用亲水性溶剂，或在较高相对湿度环境下点样，点样后应将薄层板再干燥（如真空干燥）。 点样时需注意尽量不要损伤薄层板表面。 C、吸 附剂的活性与相对湿度的影响 吸附剂的活性是由吸附剂如硅胶的表面能和表面积决定的。 硅胶的硅醇基是亲水性基团，很易吸附水分子而成为水合硅醇基而失去活性。 自制的硅胶薄层板在 105～ 110℃ 加热若干时间，就是使水合硅醇基脱水变为游离硅醇基而活化。 反之，活化后的薄层板也可以吸附大气中的水分子而降低活性。 说明硅胶表面吸附水份的作用是可逆的，在日常操作时，当活化后的硅胶（或氧化铝）薄层板从干燥器中取出，自开始。